Foram realizadas coletas de lagartas do cartucho em seis localidades na região do Matopiba e levadas para a obtenção da F1 no laboratório de Proteção de Plantas da Universidade Federal do Piauí, Campus Professora Cinobelina Elvas, onde se fez ensaios de susceptibilidade da Spodoptera frugiperda às proteínas Bt Vip3Aa20 e Cry expressadas em plantas de milho, utilizando larvas de terceiro instar. Foram estimadas curvas de sobrevivência para as 6 populações em três cultivares de milho Bt, expressando as proteínas Vip3Aa20 e um cultivar convencional como parâmetro de comparação. Além da curva de sobrevivência, calculamos também o TL50 de cada população em cada um dos cultivares de milho Bt. De acordo com os resultados dos ensaios, todas as populações da lagarta do cartucho, em terceiro instar, se mostraram susceptíveis às proteínas Vip3Aa20 expressas nos cultivares de milho utilizados. Entretanto, houve diferença significativa no tempo mediano de mortalidade das larvas alimentadas com o milho Bt, entre os cultivares utilizados e entre as populações testadas. Esses resultados indicam que ainda existe susceptibilidade de larvas de terceiro instar da lagarta do cartucho aos cultivares de milho Bt, de acordo com as tecnologias de cada cultivar utilizado.