A lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda) é um inseto praga lepidóptero, polífago e migratório e é notoriamente invasivo em plantações por todo o mundo. Presente em grandes proporções nas Américas, suas populações são manejadas com milho transgênico ou variedades de algodão que produzem proteínas inseticidas de Bacillus thuringiensis (Bt), principalmente Vip3Aa piramidado com proteínas Bt Cry. Foi determinada a suscetibilidade das populações da lagarta do cartucho em locais sob pressão com tais híbridos de milho há mais de cinco anos. Utilizou-se bioensaios de suscetibilidade e tempo-mortalidade com larvas do primeiro ao quarto instar, utilizando a geração F1 de cinco populações geograficamente distintas coletadas em campos de milho de uma região agrícola tropical abrangendo quatro estados brasileiros, além da aplicação de um questionário com os produtores de milho desta mesma região. A progênie neonata das populações de campo foi mantida em dieta artificial até o instar a ser testado, e então determinou-se as suas curvas de sobrevivência e a suscetibilidade na folhagem de três híbridos de milho expressando as proteínas Bt Vip3Aa/Cry. A morte das lagartas nos quatro instares testados não seguiu a nenhum padrão, havendo variação nas curvas de sobrevivência e na suscetibilidade das lagartas em diferentes instares e tratamentos. Nas larvas de primeiro instar, a menor suscetibilidade ficou na população de Uruçuí-PI (35% de mortalidade) no tratamento DKB390 Pro4, nas populações de segundo instar a menor suscetibilidade foi da população de Currais-PI (80% de mortalidadade), nas populações de terceiro ínstar houve a maior suscetibilidade com taxas de mortalidade atingindo 98-100% em menos de cinco dias, independentemente do híbrido de milho Bt. Dentre as populações de quarto instar houve maior variação na suscetibilidade, sendo que as populações da Bahia e Uruçuí-PI apresentaram a menor suscetibilidade, com médias estatisticamente iguais em todos os tratamentos. No entanto, houve diferença significativa, tanto quando comparados os tratamentos entre si, quanto na comparação entre as populações e entre os instares larvais. Portanto, as larvas da geração F1 de terceiro instar das populações da lagarta do cartucho eram largamente susceptíveis à folhagem de milho produtora de Vip3Aa/Cry, e a suscetibilidade mais contrastante ocorreu nos insetos dos estados do Piauí, (Currais e Uruçuí) e Bahia. Estes resultados evidenciam claramente que as maiores variações com menor percentual de mortalidade foram encontradas na população da Bahia de quarto instar e na população de Uruçuí-PI no primeiro e quarto instar. Percebe-se que não houve um padrão de mortalidade entre os instares, portanto não houve diminuição da suscetibilidade associado aos instares tardios. Assim como o questionário trouxe como resposta um aumento na resistência nas populações de campo, em todos os instares. Esta pesquisa informa a necessidade de tomada de decisão para o manejo da resistência às culturas Bt por produtores, técnicos e pesquisadores em agricultura local, regional e mundial.