O gênero Dipteryx, pertencente à família Fabaceae, possui cerca de 14 espécies, sendo encontrado no Brasil nas regiões Amazônica, Nordeste e Central, bem como na América Central (Costa Rica e Panamá) e Venezuela. As plantas desse gênero são utilizadas na medicina tradicional, pois possuem propriedades medicinais, sendo utilizadas no tratamento de problemas respiratórios, como asma e bronquite, anti-inflamatório e analgésico natural, e no tratamento de dores musculares e articulares. Plantas deste gênero possuem cumarinas, flavonoides, terpenoides, ácidos graxos e diterpenoides furanocassanos em sua composição química. Este trabalho relata os constituintes químicos identificados e atividades biológicas nas frações acetato de etila (FAcOEt) e etérea (FEt) das folhas de Dipteryx lacunifera. A caracterização química das substâncias isoladas e/ou frações foi realizada pela técnica de Ionização por eletrospray e espectrometria de massa (ESI(-)-ITMSn), cromatografia líquida de ultra eficiência acoplada à espectrometria de massas com analisador quadruplo por tempo de voo e ionização por eletrospray (UPLC-ESI-QTOF-MS/MS) e Ressonância magnética nuclear (RMN). A atividade antioxidante foi investigada pelo ensaio com o radical DPPH e a citotoxicidade pelo método MTT frente às linhagens tumorais SNB 19 (glioblastoma), PC3 (próstata), e HCT 116 (adenocarcinoma colorretal). O fracionamento cromatográfico da FAcOEt resultou no isolamento do flavonoide vitexina (I) e isoquercetina (VI), onde as estruturas dos compostos foram identificadas por métodos espectroscópicos de RMN 1H e 13C, ESI(-)-ITMSn e por comparação com dados da literatura. A análise das subfrações (SADL-122, SADL-145-10-41-1, SADL-169-18), oriundas da FAcOEt, por ESI(-)-ITMSn resultou na anotação de seis compostos (I-VI) pertencentes a classe dos flavonoides (I, II, III e VI) e procianidinas (IV e V), a análise das frações por UPLC-ESI-QTOF-MS/MS e construção de redes moleculares (GNPS) permitiu a anotação de quatorze compostos (VII – XX), pertencentes a diversas classes de flavonoides, classificados como: flavonoide-O-glicosídeo (VII, VIII, IX, X, XII, XV, XVI, XIX), flavonoide-O-metoxilado (XI), flavona-C-glicosídeo (XIII, XVII), flavonol (XIV), proantocianidina (XVIII) e flavanonol-O-glicosídeo (XX). A fração FAcOEt apresentou o maior percentual de atividade antioxidante CE50 = 39,50 ± 6,51 (μg L-1). As frações FAcOEt e FEt foram inativas frente as linhagens de células tumorais testadas. Os resultados obtidos neste trabalho acrescentam novos conhecimentos acerca da composição química e atividades biológicas das folhas da espécie D. lacunifera.