Ação de antioxidante sintético e natural em sêmen criopreservado de equinos, avaliado por testes in vitro.
garanhão; sêmen; criopreservação; antioxidante.
Objetivou-se com este trabalho avaliar o efeito da adição dos antioxidantes Butil hidroxi-tolueno (BHT) e extrato etanólico da casca do caule do Cumbretum leprosum (mufumbo) ao diluidor Botu-Crio® para congelação de sêmen equino. Foram utilizados quatro reprodutores da raça Quarto de Milha, com fertilidade comprovada por meio de histórico reprodutivo e exame andrológico, sendo os ejaculados obtidos pelo método de vagina artificial. Foram realizadas quatro colheitas por animal, totalizando 16 ejaculados. Os ejaculados foram avaliados segundo os critérios estabelecidos pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal - CBRA e, em seguida, submetidos à diluição em BotuCrio® acrescido de antioxidante de acordo com os grupos experimentais, previamente estabelecidos: Experimento I: T1= Botu crio (controle); T2 = Botucrio+ extrato 30 mg; T3 = Botucrio+ extrato 60mg; T4 = Botucrio+ extrato 120 mg) e Experimento II T1= Botucrio (controle); T2 = Botucrio + BHT 0,5 mM; T3 = Botucrio+ BHT 1,0 mM; T4 = Botucrio + BHT 2,0mM), obedecendo à concentração de 100 x 106 espermatozóides∕ ml. As amostras de sêmen foram acondicionadas em palhetas (0,5 ml), submetidas à curva de congelamento convencional, não automatizada. A curva utilizada seguiu o protocolo estabelecido por KNEIBEL (1993). Em seguida, as amostras foram armazenadas em botijão criobiológico (-196º C). Após duas semanas de armazenamento, as amostras foram descongeladas para avaliação da qualidade espermática segundo os parâmetros: motilidade e cinemática utilizando o sistema de Análise Computadorizado (CASA), membrana espermática e potencial de membrana mitocondrial usando a técnica de sondas fluorescentes, integridade de membrana pelo teste hiposmótico (HOST) e avaliação de motilidade e vigor pelo Teste de Termoressistência. As análises estatísticas foram realizadas utilizando-se o software estatístico SPSS (StatisticalPackageof Social and Science ) versão 20.0, obedecendo a um delineamento em blocos ao acaso, utilizando-se o teste da ANOVA para verificar a existências (ou não) de diferenças estatisticamente significativa dos tratamentos (concentrações) e posteriormente a realização do teste SNK (Student-Newman-Keuls), de comparação das médias a 5% de probabilidade de erro,para verificar quais tratamentos apresentavam diferença entre si. Adição de extrato etanólico de Combretum leprosum ao meio diluidor para a congelação de sêmen equino, na concentração de 120 mg promoveu a proteção das células espermáticas contra os danos oxidativos por um período de tempo maior quando comparado aos demais tratamentos. A adição de butil hidroxi-tolueno (BHT), nas concentrações de 0,5 mM, 1,0 mM e 2,0 mM, preservou integridade e viabilidade dos espermatozoides criopreservados de garanhões. Há uma influencia notória das características seminais dos animais na ação do antioxidante.