Pós-biótico é o termo usado para definir os fatores solúveis, produtos ou subprodutos metabólicos liberados pelas bactérias pró-bióticas vivas ou após a lise bacteriana. Este trabalho teve como objetivo realizar a caracterização química do pós-biótico de Lacticaseibacillus rhamnosus LR-32 e avaliar seu efeito sobre o desenvolvimento do biofilme de Streptococcus mutans. Após cultivo da cepa pró-biótica, foi extraído o pós-biótico por centrifugação da cultura e filtragem do sobrenadante. Esse pós-biótico foi utilizado para realizar sua caracterização por meio da Cromatografia Gasosa acoplada à espectrometria de massas, determinar a inibição do crescimento de Streptococcus mutans em sua forma planctônica e para avaliar os seguintes parâmetros de biofilmes de 48h de Streptococcus mutans: bactérias viáveis, peso seco e expressão gênica de glucosiltransferases. O grupo controle consistiu no biofilme de Streptococcus mutans sem nenhum tratamento. Para a análise estatística foi realizado Teste t pareado com p fixado em 5%. Foram identificados 17 compostos no pós-biótico de Lacticaseibacillus rhamnosus LR-32de várias classes químicase o tratamento com o pós-biótico levou a uma inibição do crescimento de Streptococcus mutans em sua forma planctônica, bem como a diminuição do número de bactérias viáveis, redução do peso seco nos biofilmes de Streptococcus mutans, além de regular negativamente a expressão gênica de gtfB, gtfC, gtfD e vicR.Dessa forma, os compostos mais abundantes no pós-biótico de Lacticaseibacillus rhamnosus LR-32 correspondiam ao ácido cítrico, silanol e β-D-glicopiranose e sua aplicação em modelo debiofilme in vitro interferiu no desenvolvimento do biofilme de Streptococcus mutans.