Os Peptídeos Antimicrobianos (PAMs) são encontrados em todos os seres vivos, produzidos de maneira constitutiva ou induzidos em resposta a estresses físicos, químicos e biológicos. Possuem atividade contra vários microrganismos, tais como bactérias, fungos e parasitos. Os principais mecanismos de ação dos PAMs envolvem desestabilização da membrana dos microrganismos, representando uma menor probabilidade do desenvolvimento de resistência microbiana. Desse modo, podem ser uma alternativa potencial no combate a microrganismos resistentes. O peptídeo denominado Pep 3, do glúten do trigo, foi relatado com atividade contra esporos de Penicillium sp. Este trabalho teve por objetivo avaliar o potencial antibacteriano, antifúngico e antileishmania do peptídeo Pep 3, além de utilizar ferramentas computacionais para construir moléculas análogas a este peptídeo, com o objetivo de aprimorar sua ação antifúngica. Os testes antimicrobianos foram realizados em placas de 96 poços pelo método de microdiluição. As interações do Pep 3 com o itraconazol foram realizadas usando o método de tabuleiro de xadrez. Pep 3 apresentou atividade antifúngica contra Criptococcus neoformans e Candida albicans na concentração de 400 µg/mL. Além disso, apresentou atividade sinérgica com itraconazol para Aspergillus fumigatus e C. krusei (IFCI = 0,5). Na concentração máxima de 400 µg/mL não foi observado atividade hemolítica e não foi citotóxico para células LLC-MK2 (200 µg/mL). Pep 3 não demonstrou atividade antibacteriana (CIM > 400 µg/mL) e antileishmania nas concentrações testadas. Este trabalho traz resultados potenciais para a terapia antifúngica, especialmente para o tratamento de candidemia e aspergilose, em que a combinação do Pep 3 com agentes antifúngicos poderia reduzir o aparecimento da resistência, ao passo que diminuiria a toxicidade causada por estes últimos. Os análogos Pep3A1 e Pep3A2 apresentaram melhores características físico químicas em relação a Pep 3, além de demonstrarem probabilidade de atividade antifúngica (99%) mais alta em relação aos 80% de Pep 3. Não foi observada toxicidade nos peptídeos e todos foram classificados como não hemolíticos. A criação de análogos do Pep 3, via ferramentas computacionais, resultou em peptídeos com propriedades antifúngicas aprimoradas e sem toxicidade significativa. Tais resultados devem ser comprovados em análises posteriores.