Dentre os recursos vegetais disponíveis na região Nordeste, destaca-se a castanheira-de-gurguéia (Dipteryx lacunifera Ducke), espécie popularmente conhecida como 'castanheira de burro' ou 'fava de morcego', apreciada por suas amêndoas. No entanto, há poucas publicações e conhecimento limitado sobre o potencial de suas biomoléculas, especialmente seus resíduos. O objetivo foi extrair, caracterizar bioquimicamente e avaliar a toxicidade de proteases obtidas da casca do fruto da castanheira-de-gurguéia (Dipteryx lacunifera Ducke) e avaliar sua estabilidade em ração para frangos de corte. Para obtenção do extrato bruto, os frutos (SISGEN AFF149E) foram coletados, separados de suas cascas, que foram então lavadas, secas e moídas em moinho até a formação de um pó fino. Este pó foi diluído a 10% (p/v) em tampão fosfato de sódio 0,1 M a pH 8, mantido sob agitação por 120 minutos à temperatura ambiente e, em seguida, centrifugado a 10.000×g por 15 minutos. O sobrenadante foi usado para análises posteriores. A atividade de protease e a quantificação de proteína do extrato foram determinadas. A caracterização bioquímica foi realizada avaliando o pH ótimo (3 a 11), a temperatura ótima (10 a 90 °C) e os efeitos dos íons (Na+, K+, Ca2+ e Mg2+). A avaliação da toxicidade foi realizada usando o teste de Artemia salina. A estabilidade das proteases na ração para frangos de corte foi avaliada usando dois tipos de ração: peletizada e farelada. O extrato bruto apresentou atividade de protease de 30,66 U/mL e atividade específica de 66,65 U/mg. Dentre os resultados encontrados, o pH ótimo foi 11, e a enzima perdeu 50% de sua atividade neste pH após 24 horas. A temperatura ótima para a protease foi 50°C, e a atividade permaneceu estável por até 90 minutos. Em relação aos efeitos dos cofatores, apenas o íon Mg2+ aumentou a atividade da protease em 11%, enquanto os demais promoveram diminuição da atividade. O extrato não apresentou toxicidade contra Artemia salina, mesmo após 48 horas de exposição. No ensaio de estabilidade enzimática com rações peletizadas e fareladas, foi observada estabilidade de 100% da atividade enzimática quando a enzima foi adicionada em ambas as rações testadas. Conclui-se que as proteases extraídas de D. lacunifera Ducke têm potencial para serem aplicadas como futuros aditivos enzimáticos, pois não apresentaram toxicidade in vitro, suas características bioquímicas foram descritas e demonstraram estabilidade nas rações para aves testadas.